产品介绍

基 因 型MATα, ura3, his3, trp1, LexAop (x6)-LEU2简 要 说 明EGY48菌株是Clontech公司开发的LexA 系统酵母双杂实验用菌株，MATa型，可直接转化质粒进行蛋白互作验证或筛库试验；Transformation  marker为: his3, trp1, ura3，报告基因为：LEU2；报告基因UAS（上游激活序列）来源于LexA op(x6)，只有当Bait和Prey互作时才能启动LEU2表达。EGY48-LexA酵母双杂系统系统需要三种质粒配套使用：pLexA、pB42AD、p8op-LacZ。质粒pLexA的筛选标志为HIS3，用于表达DNA-BD(来自原核的202个氨基酸残基组成的LexA蛋白)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白；质粒pB42AD的筛选标志为TRP1，用于表达AD(来自疱疹病毒的88个氨基酸残基组成的B42AD蛋白)与目标蛋白（Prey）的融合蛋白；报告质粒p8op-LacZ的筛选标志为URA3，报告基因为LacZ，报告基因UAS来源于LexA op(x8) ，只有当Bait和Prey互作时才能启动LacZ表达。High5TM系列Y2HGold感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，经PGBKT7质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA 。操 作 说 明1.取1管感受态细胞置冰上融化，6 000 rpm离心1min，去掉上清。2.加入320 μl LiTE/PEG溶液，重悬细胞，然后加入10μl Carrier DNA(95-100 度5min 快速冰浴，重复一次)，预冷目的质粒2-5ug,体积不多于20ul。3.充分混匀，于30度250 rpm转速下培养30 min。4.42度热激2.5min。5.6000 rpm离心1min，去掉上清。6.加入1 ml TE溶液，温和重悬细胞。7.6000 rpm离心1min，去掉上清。8.加入100 μl TE溶液，重悬细胞，将细胞涂布于相应的营养缺陷型固体合成培养基。9.30度倒置培养48-96h，直至形成大小合适的酵母菌落。Preparation of Media：YPDA （1L）:Tryptone                20gyeast extract             10g 0.2% adenine            15ml补水到 950ml，  用盐酸调PH到 6.5Agar                 20g (for plates only)121度，15分钟高压灭菌，待培养基温度降到55度时，加入已过滤的40% 葡萄糖 50 ml0.2% adenine(1L)Adenine    2g补水 到1L，溶解后高压灭菌或0.22um滤膜过滤除菌注 意 事 项1.感受态细胞最好在冰上融化。2.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。3.同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。4.EGY48酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。5.酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆。

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