产品介绍

本产品是用于分离人外周血淋巴细胞的无菌、低内毒素水平的密度梯度分离液。其分离原理是根据血细胞的密度差异（红细胞和粒细胞密度为1.090 g/mL左右；淋巴细胞和单核细胞密度为1.075~1.090 g/mL；血小板为1.030~1.035 g/mL），通过离心使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，从而将淋巴细胞从人外周血或脐带血中分离出来。 使用说明：1、取2mL新鲜抗凝（EDTA、枸橼酸钠或肝素等抗凝剂均可）全血，用等体积等渗溶液（PBS或生理盐水）稀释全血。2、在离心管中加入一定体积的分离液，将稀释后的血液小心加入，使其平铺到分离液液面上方，保持量液面界面清晰。分离液、抗凝未稀释全血、等渗溶液（PBS或生理盐水）的体积比为2:1:1。3、室温条件下，以1000×g离心（水平转子）离心30~40min。4、离心结束后，离心管中由上至下细胞分四层。第一层为血浆层（含血小板），第二层为环状乳白色白膜层，即单个核细胞层（包含单核细胞和淋巴细胞），第三层为透明分离液层，第四层为红细胞层（含大量中性粒细胞），小心吸取白膜层至新的离心管中。5、用3倍体积的等渗溶液（PBS、生理盐水或培养基等）轻柔混匀细胞后，以300×g离心10min，弃上清。重复洗涤1~2次。6、用等渗溶液（PBS、生理盐水、培养基等）将细胞重悬，用以细胞计数。为满足客户实际使用需求，根据不同血液样本量推荐具体实验操作方法如下：一、使用15mL离心管时：情况A：血液样本量小于3mL时，实验方法如下： 1、取一支15mL离心管，加入3mL分离液。2、用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，1000×g，离心20-30min（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。3、离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色淋巴细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。4、用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15mL离心管中，向所得离心管中加入10mL等渗溶液，混匀细胞。5、300×g，离心10min。6、弃上清。7、用吸管以5mL等渗溶液重悬所得细胞。8、300×g，离心10min。9、重复6、7、8，弃上清后以1mL后续实验所需相应液体重悬细胞。情况B：血液样本量为3-6mL时，实验方法如下：1、取一支15mL离心管，先加入与血液样本等量的分离液。2、用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，1000×g，离心20-30min（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果，但最大离心力最好不超过1200×g）。3、离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色淋巴细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。4、用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15mL离心管中，向所得离心管中加入10mL等渗溶液，混匀细胞。5、300×g，离心10min。6、弃上清。 7、用吸管以5mL等渗溶液重悬所得细胞。8、300×g，离心10min。9、重复6、7、8，弃上清后以1mL后续实验所需相应液体重悬细胞。二、使用50mL离心管时：情况A：血液样本量为7-10mL时，实验方法如下：1、取一支50mL离心管，先加入与未稀释的血液样本等量的分离液。2、用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，1000×g，离心20-30min（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果，但最大离心力最好不超过1200×g）。3、离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色淋巴细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。4、用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15mL离心管中，向所得离心管中加入10mL等渗溶液，混匀细胞。5、300×g，离心10min。6、弃上清。7、用吸管以5mL等渗溶液重悬所得细胞。8、300×g，离心10min。9、重复6、7、8，弃上清后以1mL后续实验所需相应液体重悬细胞。情况B：血液样本量为11-20mL时，实验方法如下：1、取一支50mL离心管，先加入与未稀释的血液样本等量的分离液。2、用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，500-1100×g，离心20-25min（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果，但最大离心力最好不超过1200×g）。 3、离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色淋巴细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。4、用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一15mL离心管中，向所得离心管中加入10mL等渗溶液，混匀细胞。5、300×g，离心10min。6、弃上清。7、用吸管以5mL等渗溶液重悬所得细胞。8、300×g，离心10min。9、重复6、7、8，弃上清后以1mL后续实验所需相应液体重悬细胞。 注意事项：1、本产品仅限科研使用。2、严禁使用过期产品。3、本产品由专业人员使用，使用前应仔细阅读说明书，并做好个人防护。4、若本产品不慎与皮肤接触或进入人眼，需用大量清水冲洗，如果仍有不适请及时就医。5、产品使用后产生的医疗废物应按国家相关规定处理。6、稀释血液或洗涤细胞时， 不可使用含Ca²⁺、Mg²⁺的缓冲液或培养基，否则会降低细胞得率或纯度。 7、本产品最佳使用环境为正常大气压，温度为20°C±2°C，否则会影响质量。