产品介绍

​DiD染料是亲脂性荧光染料家族成员之一，它可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。当DiD与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，这类染料有着很高的淬灭常数和激发态寿命。一旦对细胞染色，这类染料在整个细胞膜上扩散，最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。DiD（远红色荧光）可以用来对活细胞进行成像和流式分析。DiD可以用633 nm He–Ne激光器激发，有着比DiI（一种常见的细胞荧光染料）更长的激发波长和发射波长，在细胞和组织染色中更有价值。 DiD染色后可进行多聚甲醛（不可使用甲醇等其他试剂）的固定，但不建议在染色后进行透化的过程。此外，在固定透化（室温下用0.1% TritonX-100 透化）后，也可以很好地进行质膜染色。 以每次使用100 μL染色工作液，染色工作液浓度5 μM计算，10 mg配置为工作液大概可以用19009次。产品参数：Ex/Em (MeOH) = 644/663 nm注意事项：1. 使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。 2. DiD染色固定的细胞或组织样品时，通常使用配制在PBS中的4%多聚甲醛进行固定，使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。 3. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。 4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。应用范围：细胞膜荧光染料；神经元顺行和逆行示踪；细胞长期示踪使用方法：1.染色液制备（1）配制储液：储液用无水DMSO或EtOH配制，浓度1~5mM。注：未使用的储存液分装储存在-20°C，避免反复冻融。（2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储液，配制浓度为1~5μM的工作液。注：工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度的10倍范围内开始最优浓度的摸索。2.悬浮细胞染色（1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。（2）37°C孵育细胞2~20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20 min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记效果。（3）孵育结束，1000~1500 rpm离心5 min。倾倒上清液，再次缓慢加入37°C预热的生长培养液重悬细胞。（4）重复步骤（3）两次以上。3.贴壁细胞染色（1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。（2）从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，但要使表面保持湿润。（3）在盖玻片的一角加入100 μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。（4）37°C孵育细胞2~20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20 min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记的效果。（5）吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2~3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5~10 min，然后吸干培养基。但要使表面保持湿润。4. 结果检测样品可在培养基中进行检测，可通过荧光显微镜成像或流式细胞仪分析。