源叶免疫组化(IHC)标准实验流程及产品推荐
石蜡切片标准流程 · 样本制备至封片观察全流程 · 各步骤源叶试剂与耗材推荐
免疫组化(Immunohistochemistry, IHC)利用抗原-抗体特异性结合原理,在组织切片上原位定位靶蛋白,是病理诊断与生命科学研究的核心手段之一。源叶生物提供覆盖 IHC 全流程的试剂,从组织固定到封片观察,共涉及 1,485+ 个在售产品,可满足常规 DAB 显色到荧光多重标记的不同需求。
标准 IHC 实验流程(石蜡切片)
提示: 每一步孵育之后都必须用 PBS 或 TBS 充分洗涤(3 次,每次 5 分钟),该操作贯穿全程,不单独列为一步。
| 步骤 | 操作内容 | 说明 |
|---|---|---|
| 1 | 样本固定 | 将组织浸入 4% 多聚甲醛,室温固定 12–24 小时,保持形态与抗原完整性。 |
| 2 | 脱水 | 梯度乙醇(70% → 80% → 95% → 100%)逐级脱水,去除组织水分。 |
| 3 | 透明 | 二甲苯或环保透明剂处理,为浸蜡做准备。 |
| 4 | 浸蜡与包埋 | 石蜡渗透组织,包埋成蜡块,便于切片。 |
| 5 | 切片 | 石蜡切片机切成 3–5μm 薄片,贴于防脱玻片。 |
| 6 | 烤片与脱蜡 | 60℃ 烤片 1–2 小时,二甲苯脱蜡,使切片牢固贴附。 |
| 7 | 水化 | 梯度乙醇反向处理至水,恢复组织水分。 |
| 8 | 抗原修复 | 微波/高压/酶修复,暴露被交联的抗原表位(石蜡切片关键步骤)。 |
| 9 | 灭活内源性酶 | 3% H₂O₂ 孵育 10–30 分钟,消除内源性过氧化物酶干扰。 |
| 10 | 封闭 | 血清或封闭液室温孵育 15–30 分钟,减少非特异性结合。 |
| 11 | 一抗孵育 | 滴加一抗,4℃ 过夜或室温 1–2 小时,特异性结合靶抗原。 |
| 12 | 二抗孵育 | 滴加酶标/荧光标记二抗,室温 30–60 分钟,放大检测信号。 |
| 13 | 显色 | DAB/AEC 等底物显色,使阳性信号可视化。 |
| 14 | 复染 | 苏木素染细胞核,衬托组织形态。 |
| 15 | 封片观察 | 封片剂封片,显微镜下观察并记录结果。 |
各步骤源叶推荐产品
以下产品信息均来自源叶官网公开资料,具体货号、价格及库存请以官网实时信息为准。
| 对应步骤 | 货号 | 产品名称 | 规格 | 参考价(元) |
|---|---|---|---|---|
| 步骤 1–7 · 样本制备(固定 → 包埋 → 切片 → 脱蜡) | ||||
| 1 | S52806-500g | 切片石蜡 | 500g | 54.00 |
| 1 | R20497-100ml | 多聚甲醛溶液(4% PFA,组织细胞固定液) | 100ml | 40.00 |
| 1 | R21480-500ml | 生理盐水(10×NS,无菌) | 500ml | 45.00 |
| 步骤 8 · 抗原修复 | ||||
| 8 | R20403-500ml | EDTA 脱钙液(10%) | 500ml | 60.00 |
| 8 | R20902-100ml | Tris-EDTA 抗原修复液(10×,pH 8.0) | 100ml | 70.00 |
| 8 | R20910-100ml | 柠檬酸钠抗原修复液(50×) | 100ml | 74.00 |
| 8 | R20899-100ml | Tris 抗原修复液(10×,pH 9.0) | 100ml | 88.00 |
| 步骤 9 · 灭活内源性酶 | ||||
| 9 | — | 3% H₂O₂ 溶液(可自行配制或选购源叶相关产品) | — | — |
| 步骤 10 · 封闭 | ||||
| 10 | R20927-100ml | 免疫染色封闭液 | 100ml | 120.00 |
| 步骤 11 · 一抗孵育 | ||||
| 11 | R40019-100ml | 通用型抗体稀释液 | 100ml | 110.00 |
| 步骤 12 · 二抗与检测系统 | ||||
| 源叶提供 HRP、荧光、AP、生物素-链霉亲和素等多种二抗及检测系统,共 408 个产品。具体货号需根据一抗种属(如兔/鼠)和标记类型在官网查询。 | — | |||
| 步骤 13 · 显色 | ||||
| 13 | R20570-2×100ml | 苏木素伊红(HE)染色液(醇溶) | 2×100ml | 140.00 |
| DAB 显色液、AEC 底物等可另行在官网搜索“DAB”或“显色”获取。 | — | |||
| 步骤 14–15 · 复染与封片 | ||||
| 常用苏木素(可选购 HE 染色液中的苏木素组分或单独购买) | — | |||
| 15 | R20889-5ml | 抗荧光淬灭封片剂 | 5ml | 70.00 |
温馨提示: 源叶生物拥有超过 85 万种 SKU,IHC 相关产品涵盖全部实验环节。如需查询更多具体产品的货号、价格与库存,请直接访问 源叶官网 或联系销售代表。部分产品(如特异性一抗)需根据目标抗原自行匹配,官网提供完善的筛选工具。
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