产品介绍

膜联蛋白（Annexins）是一类钙离子依赖型磷脂结合蛋白，能特异性结合磷脂酰丝氨酸（PS）。在正常生理状态下，PS只分布在细胞膜脂质双层的内侧。细胞凋亡早期, PS由脂膜内侧翻向外侧, 在磷脂双分子层中的不对称分布丧失, 从而使细胞成为被吞噬的目标。一旦PS暴露在膜的外表面, 它便可在钙离子存在的情况下, 被荧光标记的膜联蛋白V（Annexin V）检测到。在凋亡早期，活性染料（如碘化丙啶PI、7-AAD）不能通过细胞脂膜。这类细胞便只会被Annexin V染色，但不被活性染料染色，从而可区分出处于早期凋亡的细胞。然而，在凋亡晚期，细胞膜完整性丧失，使得Annexin V也能结合细胞内部的PS。此时，活性染料可用于区分晚期凋亡和坏死细胞（Annexin V阳性、活性染料阳性）与早期凋亡细胞（Annexin V阳性、活性染料阴性） 本试剂盒适用于通过流式细胞术对死亡细胞（如凋亡或坏死细胞）进行鉴定和计数。

注意事项：

1. 使用时请避光以减缓荧光淬灭；
2. 7-ADD染料具有具有剧毒性和致突变性，操作时需谨慎；
3. 由于膜联蛋白V（Annexin V）与磷脂酰丝氨酸（PS）的结合具有钙依赖性，因此在Annexin V实验中务必避免使用含EDTA或其他钙螯合剂的缓冲液。

使用说明：

1. 使用前需将10x 结合缓冲液用去离子水稀释至1x（1mL 10x缓冲液加9mL去离子水）；
2. 预冷PBS清洗细胞两次后，按照 0.5-1.0x10⁶ cells /mL 的密度用1x Annexin V结合缓冲液重悬；
3. 每100μL细胞悬液中加入2μL Annexin V-AF647及2μL 7-AAD染料；
4. 加入100 μL结合缓冲液， 轻柔涡旋混匀细胞，室温避光孵育10 min；
5. 1h内完成上机分析。