无机磷含量检测试剂盒（硫酸亚铁钼蓝, 比色法）

产品介绍

血清中的无机磷（Inorganic Phosphorus）主要由H₂PO₄⁻和HPO₄²⁻两种磷酸根阴离子组成，上述阴离子在不同的pH环境下能快速相互转换。在pH7.4血清中两种磷酸根阴离子浓度比例为1:4，在酸中毒环境下二者浓度约为1:1，在碱中毒环境下二者浓度比例为1:9，在pH4.5尿液中浓度比例为100:1。WHO推荐的常规检测方法为比色法，我国卫生部临检中心推荐的常规方法为硫酸亚铁钼蓝比色法和米吐尔钼蓝比色法。检测原理：先经硫酸亚铁提纯蛋白，利用无机磷与钼酸铵结合生成磷钼酸铵，后者被硫酸亚铁还原成蓝紫色的复合物，通过分光光度计检测640nm处吸光度，根据公式计算出无机磷含量。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

自备仪器和试剂

1、去离子水2、电子天平、离心管或试管、离心机、比色杯、分光光度计

实验流程

1、制备样品

1.1 血浆、血清样品取0.1ml待测血浆、血清样品，加入2.4ml Pi Assay Buffer，充分混匀，室温静置10min，3000g离心10min，取上清，-20℃冻存，用于Pi的检测。

1.2 尿液样品取适量的待测尿液，用50%的盐酸调pH至6.0，用蒸馏水做1:10~20稀释。取0.1ml稀释后的尿液样品，加入2.4ml Pi Assay Buffer，充分混匀，室温静置10min，3000g离心10min，取上清，-20℃冻存，用于Pi的检测。

1.3 细胞或组织样品取恰当细胞或组织进行匀浆，低速离心取上清，取0.1ml匀浆样品，加入2.4ml Pi Assay Buffer，充分混匀，室温静置10min，3000g离心10min，取上清，-20℃冻存，用于Pi的检测。

1.4 高浓度样品如果样品中含有较高浓度的Pi，可以使用去离子水稀释。

注：样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的Pi含量。推荐使用阿拉丁B665595 BCA蛋白定量试剂盒或R1491648 即用型BCA蛋白定量试剂盒。

2、制备磷标准工作液取适量的磷标准 (1mg/mL)，按磷标准 (1mg/mL)：标准品稀释液=1:24的比例稀释，即获得磷标准 (1.292mmol/L)；取0.1ml磷标准 (1.292mmol/L)，加入2.4ml Pi Assay Buffer，充分混匀，室温静置10min，3000g离心10min，取上清，即为磷标准工作液，-20℃冻存，用于Pi的检测。

3、配制钼酸铵显色液将钼酸铵粉末和钼酸铵稀释液按0.44g：10ml的比例混合溶解，即可使用。钼酸铵显色液不宜长期保存，一般配制后4℃保存，2周有效。

4、Pi加样按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡，按下表操作。如果样品中的Pi含量过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置2平行管，求平均值。加入物 (ml)空白管标准管测定管Pi Assay Buffer2——处理后的磷标准工作液—2—处理后的待测上清液——2钼酸铵显色液0.250.250.25 

5、Pi测定混匀，室温静置15min，以空白管调零，比色杯光径1cm，分光光度计640nm处检测标准管、测定管的吸光度（即为A标准，A测定）。 

6、结果计算血清、血浆中无机磷计算公式：磷 (mmol/L)=(A测定/A标准)×1.292尿液中无机磷计算公式：磷 (mmol/d)=(A测定/A标准)×1.292×N×24h尿量(L)组织中磷计算公式：磷 (mmol/mg)=(A测定/A标准)×1.292/待测样品蛋白浓度(mg/L)

参数说明：

A测定：待测管的吸光度

A标准：标准管的吸光度

N：尿液稀释倍数单位换算：1 mg/dL=10 mg/L=1 mmol/L×0.323

参考区间：样本血清磷浓度健康成年人0.96~1.62mmol/L (3~5mg/dl)儿童1.45~2.1mmol/L (4.5~6.5mg/dl) 

注意事项

1、溶血样本对检测有干扰，尽量避免采用溶血样本。

2、本法能够用于自动生化分析仪终点检测法。

3、如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。

4、本法测定的线性范围为0.01~0.2mg/ml，检测下限为0.005，检测上限为1。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 

附录：标准曲线制作：在室温条件下按说明书操作，用分光光度计对系列磷标准 (1/100、1/40、1/25、1/15、1/10、1/8 mg/ml)进行吸光度的测定。