食品中亚硝酸盐含量检测试剂盒（盐酸萘乙二胺, 微量法）

产品介绍

在食品中，亚硝酸盐可与肉品中的肌红素结合而更稳定，在食品加工业中作为保色剂，以维持肉制品的良好外观，并防止肉毒梭状芽孢杆菌的产生，提高食用肉制品的安全，但是人体长期摄入亚硝酸盐过量的食品，可诱发消化系统癌变。检测原理：在酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应生成重氮化合物，再与N-1-萘基乙二胺形成紫红色偶氮化合物，在540nm处有特征吸收峰。检测范围：1.563-100 μM灵敏度：1.563 μM注意：正式检测前，建议选择2-3个预期差异较大的样本进行预实验。

自备仪器和试剂

酶标仪或可见分光光度计（能测540nm处的吸光度）96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头制冰机、离心机、水浴锅去离子水研钵

操作步骤

1、试剂准备试剂名称试剂准备备注Extraction Solution Ⅰ即用型常温保存，本试剂为饱和溶液，有少量析出为正常现象，使用前充分摇匀。Extraction Solution Ⅱ即用型常温保存Extraction Solution Ⅲ即用型常温保存Activated Carbon即用型常温保存Reagent Ⅰ即用型，使用前平衡到室温4℃避光保存Reagent Ⅱ即用型，使用前平衡到室温4℃避光保存NaNO₂ Standard (1M)4℃保存注：Reagent Ⅱ和NaNO₂ Standard (1M) 有一定毒性，建议在通风橱进行实验。

2、标准曲线设置用去离子水将1M NaNO₂ Standard稀释成100μM。按下表所示，用去离子水将100μM NaNO₂ Standard稀释至50、25、12.5、6.25、3.125、1.563µM。序号标准品体积去离子水体积（µL）标准品浓度（μM）Std.1200µL of 100μM NaNO₂ Standard0100Std.2100µL of Std.1 (100μM)10050Std.3100µL of Std.2 (50μM)10025Std.4100µL of Std.3 (25μM)10012.5Std.5100µL of Std.4 (12.5μM)1006.25Std.6100µL of Std.5 (6.25μM)1003.125Std.7100µL of Std.6 (3.125μM)1001.563注意：每次实验都要做一次标准品检测，制作标曲；稀释后的标准品溶液不稳定，必须在4小时内使用。

3、样本制备称取样品约0.2g鲜重或0.05g干重，破碎，加入0.5mL Extraction Solution Ⅰ，沸水浴15min，冷却至室温，加入0.5mL Extraction Solution Ⅱ，震荡摇匀，加0.5mL Extraction Solution Ⅲ，用镊子加少量Activated Carbon（约1mg），混匀，静置30min，8,000 g，25℃离心15min，取上清液待测。注：加入Extraction Solution Ⅱ和Ⅲ后样本会粘稠，属于正常现象。

4、实验步骤4.1 酶标仪或可见分光光度计预热30min，调节波长到540nm。可见分光光度计用去离子水调零。 4.2 操作表（下述操作在96孔板或微量玻璃比色皿中操作）：试剂（μL）测定孔标准孔空白孔样本7000Standard0700去离子水0070Reagent Ⅰ656565Reagent Ⅱ656565混匀，25℃静置15min，于540nm处测定吸光值，记为A测定、A标准、A空白，计算ΔA测=A测定-A空白、ΔA标=A标准-A空白。注意：空白孔和标准孔只需测定1次。实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA测小于0.001可适当加大样本量。如果ΔA测大于1.0，样本可用去离子水进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。

5、结果计算注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。 5.1 标准曲线的绘制以标准液浓度为y轴，ΔA标为x轴绘制标准曲线。将ΔA测代入标准曲线公式计算出y（μM）。 5.2 样本亚硝酸盐含量计算NO₂⁻ (μg/g)=y×V样总×46÷1,000÷W×n=0.069×y÷W×n参数说明：V样总：样本总体积，1.5mL；46：NO₂⁻相对分子质量，g/mol；1,000：单位换算系数，1L=1,000mL；W：样本质量，g；n：样本的稀释倍数。

6、结果展示典型标准曲线实验实例：取0.2g咸菜使用96孔板测得计算ΔA=0.103，代入方程得y=10.345，按样本质量计算含量得： NO₂⁻ (μg/g)=0.069×10.345÷0.2×1=3.569 μg/g取0.2 g罐头肉使用96孔板测得计算ΔA=0.007，代入方程得y=0.75，按样本质量计算含量得： NO₂⁻ (μg/g)=0.069×0.75÷0.2×1=0.259 μg/g

注意事项

本产品仅供科学研究使用，不适用于临床诊断。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。