组织无机磷含量检测试剂盒（钼蓝, 微量法）

产品介绍

  无机磷主要指无机磷酸根，参与生物体内多种代谢，包括能量代谢、核酸代谢、蛋白质磷酸化和去磷酸化等，此外还可以促进碳水化合物的合成、转化和转运。  检测原理：钼酸铵与无机磷酸根生成在660nm有特征吸收峰的物质，通过测定660nm吸收度，即可计算无机磷含量。  适用样本：动植物组织产品组分表O1506749Component96TStorageO1506749AReagent Ⅰ120 mL2-8℃O1506749BReagent Ⅱ3 mL2-8℃O1506749CReagent Ⅲ1 EA2-8℃. Store in the dark.O1506749DReagent Ⅳ1 EA2-8℃. Store in the dark.O1506749EStandard1 mL2-8℃注意：正式检测前，建议选择 2-3 个预期差异较大的样本进行预实验。

自备仪器和试剂

1、酶标仪或可见分光光度计（能测 660 nm 处的吸光度） 

2、96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头3、可调式水浴锅、台式离心机4、去离子水、匀浆器

实验流程

1、试剂准备试剂名称试剂准备注意事项Reagent Ⅰ即用型；使用前平衡到室温4℃保存；有刺激性气味，建议在通风橱进行实验Reagent Ⅱ即用型；使用前平衡到室温4℃保存；有腐蚀性，建议在通风橱进行实验Reagent Ⅲ临用前配制，加入1.5mL去离子水充分溶解后使用（可置于37℃水浴5min促进溶解）4℃避光保存一周Reagent Ⅳ临用前配制，加入6mL去离子水充分溶解后使用4℃避光保存一周定磷剂按照去离子水: Reagent Ⅱ: Reagent Ⅲ: Reagent Ⅳ=10:5:2:8 的比例配制请根据实际需要进行配制，仅当天使用Standard即用型；使用前平衡到室温4℃保存

2、样本制备组织样本：称取约0.1g样本，加入1mL Reagent Ⅰ（按照组织质量 (g)： Reagent Ⅰ体积 (mL) 为1：10 的比例）进行冰浴匀浆，10,000g，4℃离心10min，取上清液，置冰上待测。 注意：如需测定蛋白浓度，推荐使用阿拉丁B665595 BCA蛋白定量试剂盒或R1491648 即用型BCA蛋白定量试剂盒。

3、实验步骤

3.1 酶标仪或可见分光光度计预热30min，调节波长到660nm。可见分光光度计用去离子水调零。

 3.2 操作表（下述操作在1.5mL离心管中操作）：试剂（μL）空白管标准管测定管样本上清0010去离子水1009090Standard0100定磷剂100100100

3.3 混匀后置于40℃水浴保温10min，室温冷却10min后取200μL 上清液于微量玻璃比色皿或96孔板中660nm处测定吸光度， 记为A空白、A标准、A测定，计算ΔA测定=A测定-A空白、ΔA标准=A标准-A空白。   注意：空白孔和标准孔只需测定1次。实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA测定过小可适当加大样本量。如果ΔA测定大于1.0，样本可用Reagent Ⅰ进一步稀释，计算结果乘以稀释倍数，或减少提取用样本量。

4、结果计算注意：我们为您提供的计算公式，包括推导过程计算公式和简洁计算公式。两者完全相等。建议以加粗的简洁计算公式为最终计算公式。

 4.1 按照蛋白含量计算无机磷含量 (μmol/mg prot)=(CStandard×ΔA测定÷ΔA标准)×V总÷Cpr=1×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr

4.2 按照样本质量计算无机磷含量 (μmol/g 鲜重)=(CStandard×ΔA测定÷ΔA标准)×V总÷W=1×ΔA测定÷ΔA标准÷W参数说明： CStandard：1 mmol/L； V总：上清液总体积，1 mL=0.001 L； W：样品质量，g。

5、结果展示（实验实例）

5.1 取0.1g绿萝加入1mL Reagent Ⅰ，离心取上清之后按照测定步骤操作，使用96孔板测得A测定=0.334，A空白=0.043，A标准=0.311，按样本质量计算无机磷含量得：无机磷含量 (μmol/g 样本)=1×ΔA测定÷ΔA标准÷0.1=10.86 μmol/g 样本。

5.2 取0.04g小鼠肌肉加入0.4mL Reagent Ⅰ，离心取上清之后按照测定步骤操作，使用96孔板测得A测定=1.201，A空白=0.042，A标准=0.29，按样本质量计算无机磷含量得：无机磷含量 (μmol/g 样本)=0.4×ΔA测定÷ΔA标准÷0.04=46.73 μmol/g 样本。

注意事项

1、定磷剂需临用前配制，限当天使用，建议 40 min 内完成检测。

2、本产品仅供科学研究使用，不适用于临床诊断。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。