产品介绍
磷是植物必需的大量元素。植物主要通过根系从土壤中获取磷元素。土壤中的磷主要以有机磷和无机磷的形式存在。而有机磷只有经过矿化分解转化为无机磷,才能进一步被植物吸收利用。
检测原理:从土壤中提取无机磷,在酸性环境中,通过钼蓝法定磷,测定在 660 nm 的吸光度,计算土壤中无机磷的含量。
适用样本:土壤样本
自备仪器和试剂
1、酶标仪或可见分光光度计(能测 660 nm 处的吸光度)
2、96孔板或微量玻璃比色皿、可调节式移液枪及枪头
3、分析天平、可调式水浴锅、台式离心机、100 目筛网
4、去离子水
实验流程
1、试剂准备
| 试剂名称 |
试剂准备 |
注意事项 |
| Extraction Buffer |
即用型;使用前平衡到室温 |
4℃保存 |
| Reagent Ⅰ |
临用前配制,48T 加入2.5mL去离子水充分溶解,96T加入5mL去离子水充分溶解后使用 |
4℃避光保存可稳定1个月 |
| Reagent Ⅱ |
临用前配制,48T加入2.5mL去离子水充分溶解,96T加入5mL去离子水充分溶解后使用 |
4℃避光保存可稳定1个月 |
| Reagent Ⅲ |
即用型 |
室温保存 |
| Standard |
即用型;使用前平衡到室温 |
4℃保存 |
| 定磷剂 |
按照去离子水:Reagent Ⅰ:Reagent Ⅱ:Reagent Ⅲ=2:1:1:1 的比例配制,配好的定磷试剂应为浅黄色 |
若无色则试剂失效,若是蓝色则为磷污染(请根据需要,用多少配多少) |
2、样本制备
土壤样品:取适量风干土壤样品,去除石块、树枝等杂质,过100目筛网,准确称取0.01g,加入1mL Extraction Buffer,室温震荡混匀,然后置于40℃水浴浸提1h,8,000 g,25℃,离心10min,取上清液,待测。
3、实验步骤
3.1 酶标仪或可见分光光度计预热30min,调节波长到660nm。可见分光光度计用去离子水调零。
3.2 操作表(下述操作在1.5mL离心管中进行):
| 试剂(μL) |
空白管 |
标准管 |
测定管 |
| 样本上清 |
0 |
0 |
40 |
| 去离子水 |
40 |
0 |
0 |
| 定磷剂 |
200 |
200 |
200 |
| Standard |
0 |
40 |
0 |
3.3 混匀后置于40℃水浴保温10min,室温冷却10min后取200μL加入96孔板/微量玻璃比色皿中于660nm测定吸光度,记为A空白、A标准、A测定,计算ΔA测=A测定-A空白、ΔA标=A标准-A空白。注意:空白孔和标准孔只需测定1次。实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果ΔA测小于0.01,可适当加大样本量。如果ΔA测大于1.0,样本可用Extraction Buffer进一步稀释,计算结果乘以稀释倍数,或减少提取用样本量。
4、结果计算
土壤样本无机磷含量计算
使用96孔板/微量玻璃比色皿测定的计算公式如下:
S-PHOS (μmol/g干重)=C标准液×ΔA测÷ΔA标×V总÷W=0.5×ΔA测÷ΔA标×V总÷W=50×ΔA测÷ΔA标
参数说明:
C标准液:500 μmol/L;
V总:总上清液体积,1 mL=0.001 L;
W:土壤样品质量,g。
5、结果展示

注意事项
1、定磷剂需临用前配制,限当天使用。
2、40min内完成检测。
3、本产品仅供科学研究使用,不适用于临床诊断。为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。