CFDA SE细胞增殖与示踪检测试剂盒

产品介绍

CFDA SE细胞增殖与示踪检测试剂盒(CFDA SE Cell Proliferation Assay and Tracking Kit)，是基于一种新型荧光探针CFDA SE的用于细胞增殖检测和细胞荧光示踪的检测试剂盒。CFDA SE目前被广泛用于替代MTT法或[3H]-thymidine掺入等其它细胞增殖检测方法。

CFDA-SE的全称为Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester，分子式为C29H19NO11，分子量为557.47，CAS number为150347-59-4。CFDA SE可以通透细胞膜，进入细胞后可以被细胞内的酯酶(esterase)催化分解成CFSE，CFSE可以偶发性地(spontaneously)并不可逆地和细胞内蛋白的Lysine残基或其它氨基发生结合反应，并标记这些蛋白。在加入荧光探针CFDA SE后大约24小时，即可充分标记细胞。

使用方法

1. 检测前的准备：

a.加入500 μL CFDA,SE溶剂到1管CFDA,SE荧光探针中进行溶解，充分混匀即得到1000×的储存液。该储存液最好在1个月内使用完毕，最长不超过2个月。剩余储存液请务必分装后于≤-20℃避光干燥保存，避免反复冻融，-70℃避光保存可适当延长保存周期。

b. CFDA SE细胞标记液的配制：准备适量无菌的细胞培养级纯水，根据实验需要配制适量的CFDA SE细胞标记液。例如，取20ml CFDA SE细胞标记液(10X)，加入180ml细胞培养级纯水，混匀后即为CFDA SE细胞标记液。配制好的CFDA SE细胞标记液可以4ºC保存，长时间不用可以-20ºC保存。注意：虽然本试剂盒已对CFDA,SE染色体系做了优化处理，但建议使用者根据自身的细胞类型，培养条件以及应用的不同来梯度摸索最佳的工作浓度，以最低工作浓度得到适宜的标记效率为准。

2. 操作步骤

1） 离心收集细胞，利用1mL 1×细胞染色缓冲液悬浮细胞于15 mL离心管，并调整细胞浓度为1-5×106个/mL；

2） 把1 mL CFDA,SE工作液(2×)加入到上述15 mL离心管内，轻轻混匀。

3） 37℃孵育10 min。注意：对于不同细胞，需要自行摸索最佳标记时间。

4） 立即在15 mL离心管内加入约10 mL完全细胞培养液(含10% FBS)，室温颠倒数下混匀，以终止标记反应。

5） 室温离心去上清，再用5-10 mL完全细胞培养液洗涤一次。

6） 再加入5-10 mL完全细胞培养液，37℃孵育10 min，以促进CFSE酯酶催化CFDA,SE得到的荧光产物在细胞内的驻留及未反应的CFDA,SE进入完全细胞培养液。离心去上清，完成最后一次洗涤。

7） 此时标记好的细胞已可进行后续的体外增殖检测或者特定目的的细胞示踪。按照正常方法培养细胞，然后在合适的时间点用荧光显微镜或流式细胞仪FL1通道进行结果分析，呈绿色荧光。标记的细胞也可用于活体动物的移植，并用荧光进行示踪。

注意：若需要对细胞进行固定，请用醛类固定剂如3.7%多聚甲醛于室温固定15 min；之后若还需要进行其他如抗体标记，请用冰丙酮透化处理细胞10 min。

注意事项：

1. CFDA SE配制成储存液后宜在一个月内使用完毕，最长不宜超过2个月。CFDA SE易被水解，在水溶液中会很快变质。请在使用过程中避免接触水。在标记细胞的过程中和水接触是在许可的范围内的。

2. CFDA SE溶剂在4ºC、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以20-25ºC水浴温育片刻至全部融解后使用。

3. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

4. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。