产品介绍
G25 蛋白脱盐预装柱,是使用 G25 葡聚糖基质研发的一款从大分子蛋白质样品中滤除盐类、咪唑等小分子物质的即用型层析柱,俗称脱盐柱。本品无需装柱,能够代替耗时的传统透析处理,以达到快速纯化蛋白质/替换蛋白质缓冲液的目的,对盐类和小分子物质的脱除率在 95%以上,蛋白样品脱盐效率高,回收率超 90%。本品支持离心法操作,主要用于去除大于 5kDa 的蛋白质、核酸、多肽、多糖等样品中盐离子、咪唑、去垢剂、小分子染料、缓冲剂等杂质。产品规格:柱体积:0.5 mL上样量:50-150μl包装:5支/25支基质:葡聚糖排阻极限:Mr5000 填料粒径:50-150μm pH 稳定性:2-13 储存:2-8 ℃产品特点:操作方便,节省时间,显著优于传统透析;对盐和小分子的脱除率在 95%以上,蛋白样品脱盐效率高;蛋白样品回收率高,达到 90%以上;可高效去除大于 5kDa 的蛋白质、多肽、核酸、多糖等样品 中盐离子、咪唑、去垢剂、小分子染料、缓冲剂等杂质。使用说明: 一、离心脱盐:
1、流出保护液:拧松脱盐柱盖子,折断柱子下端堵头,将脱盐柱置于2mL收集管中。1000xg离心2分钟,丢弃离心下来的保存溶液,并将脱盐柱放回收集管中。注:使用非水平转头的情况下,由于离心可能会使树脂压实形成一个向上的斜面,该斜面的方向宜在后续步骤中保持,在柱外壳上的斜面向上位置做标记,在随后的离心步骤中需要调整好离心管的放入方向,确保离心后斜面的方向和位置不会改变。
2、平衡:用移液器或滴管沿柱内壁缓慢加入平衡液,直至充满柱管,轻轻拧上脱盐柱上盖,1000×g离心2分钟,丢弃溶液,重复此步骤3次。
3、上样:移液器吸头贴近填料的中心位置(注意不要触及填料)缓慢加入 10%-30%柱床体积样品,使样品进入填料。
4、将脱盐柱放入新的洁净收集管中,轻轻拧上脱盐柱上盖,1000×g离心2分钟,收集管中的液体即为脱盐后的蛋白。
5、可通过 A280nm 紫外吸收值、Bradford 蛋白浓度测定、SDS-PAGE 凝胶电泳等方法检测蛋白样品浓度。 二、介质清洗与再生:
1、将使用过的脱盐柱,加入去离子水清洗,重复三次。
2、将处理好的脱盐柱,加入 20%乙醇溶液,下端放上堵头,拧紧盖子 2-8℃保存即可。
注意事项:
1、为防止交叉污染,本品建议一次性使用。 为了防止离子相互作用,建议在样品缓冲液中保持低盐浓度(25 mM NaCl)。
2、填料在高浓度醇溶液或饱和盐溶液中会有失水收缩现象,请勿将上述溶液进行过柱。
3、样品处理量应适宜,过多会影响脱盐效果,过少会影响回收效率,上样时应缓慢将样品均匀加至管中心位置。
4、当样品浓度过低时,需先将样品用超滤管浓缩到所需体积或所需浓度。
5、保存和纯化过程中应始终保持基质湿润,避免气泡进入脱盐柱中。