Multiplex Amplification Mix

产品介绍

Multiple Amplification Mix 是一款通用型多重扩增试剂，可应用于微生物/遗传突变检测多重扩增子文库构建。本试剂兼容超多重扩增，panel 引物重数范围为 1~1500+重，扩增长度范围为100~1800bp，GC 含量范围为 13%~75%，模板投入量低至 1ng。 本试剂原料经过严格的背景菌质控，可有效预防本底扩增导致的假阳性，同时严格的质量控制和功能验证，保证扩增的稳定性和重复性。 本试剂适用于二代测序多重靶向扩增方法微生物/遗传突变检测。

自备材料仪器：PCR 仪、移液器、磁力架、微型离心机、涡旋仪、琼脂糖凝胶电泳系统、紫外凝胶成像分析系统、Agilent Bioanalyzer 2100或替代仪器；

试剂： 琼脂糖、1×TAE 溶液、核酸染料、DNAmarker、 Ampure XP 磁珠或替代产品、无水乙醇(新鲜配置 80%乙醇)、无核酸酶水；

耗材：1.5 ml 离心管、0.2 ml PCR 管、移液枪头(无DNase/RNase)。

使用说明

一、多重扩增及产物检测
1、将UltraBio™ Multiplex Amplification mix 取出解冻；涡旋混匀瞬时离心，置于冰上备用。
2、在 0.2 ml PCR 管中配制如下反应混合液：

注： 常规体系 Total 体积为10μl，可调整体范围为10~50μl；当体系体积放大时，Multiplex Amplification mix 体积需等比例放大。

3、涡旋混匀，瞬时离心后将反应液收集至管底。
4、将上述 PCR 管置于 PCR 仪，运行以下反应程序：

注：T：退火温度需要根据多重引物的退火温度 T 来设定。**：常规为 25 cycles；可根据模板投入量适当调整。
5、第一步扩增产物可用 2 %琼脂糖电泳检测其产物分布情况或在Agilent 2100 Bioanalyzer 上进行长度分布检测。

二、扩增产物磁珠纯化
1、将AmpureXP 磁珠或替代产品从冰箱中取出平衡至室温，涡旋混匀。
2、将第一步扩增产物体积用无核酸酶水补至50ul，加入60 μl(1.2×)磁珠，充分涡旋混匀后室温静置 5 min。
3、短暂离心后将离心管置于磁力架上静置 3~5 min，待溶液澄清后，小心移去上清。
4、保持离心管置于磁力架上，往管中加入 200 μl 新鲜配置的 80%乙醇，室温静置 30 sec，小心移去上清。
5、重复第4操作，80%乙醇共洗涤两次。尽量弃 80%乙醇。
6、保持离心管置于磁力架上，开盖静置 2~3 min 使磁珠干燥至哑光。
7、加入 22 μl 的无核酸酶水重悬磁珠，充分涡旋混匀后，室温静置 2 min，将离心管短暂离心后置于磁力架上静置 1~2 min，待溶液澄清后，小心移取 20 μl 上清至新的 0.2 ml PCR 管中，进行下一步反应。纯化产物可在-20°C 长期保存。