Epitech HS Taq DNA聚合酶

产品介绍

Epitech HS Taq DNA Polymerase是一种化学基团修饰的耐热 Taq DNA聚合酶，在常温下没有活性，高温加热前化学修饰基团与Taq 酶结合从而抑制聚合酶的活性，避免了引物延伸的非特异性扩增或引物二聚体的产生，经过95℃热激10min后，该酶即可恢复活性。此外Epitech HS Taq DNA Polymerase没有检测到3'→5'校对外切酶活性，但具有5'→3'外切酶活性，可用于荧光定量PCR的检测。 配合优化的缓冲体系，适用于亚硫酸氢盐转化处理DNA PCR 反应，对亚硫酸氢盐转化后的含有尿嘧啶的模板DNA有更优的扩增效率、灵敏度。相比于普通DNA，亚硫酸氢盐转化后的DNA 损伤严重，会影响PCR反应性能。同样对于扩增受损的DNA样本，胞嘧啶脱氨作用会在一段较长的时间内自行发生，温度升高时脱氨速度加快，并导致DNA和游离核苷酸中尿嘧啶的累积。当其他校正酶无效时，Epitech HS Taq DNA Polymerase可以对此类含有尿嘧啶的受损DNA模板进行高效扩增。组分表FP1508941Component250U1KU5KUStorageFP1508941AEpitech HS Taq DNA Polymerase (5U/μL)50μl200μl1ml-20℃. Avoid freeze/thaw cycle.FP1508941B5×Epitech HS Taq DNA Polymerase Buffer1ml4ml20ml-20℃. Avoid freeze/thaw cycle适用范围 适用于亚硫酸氢盐转化处理 DNA 的 PCR 反应。
注意事项 本实验中，亚硫酸氢盐的预处理过程将直接影响模板 DNA 的质量；处理后的模板不能长期储存，-20℃放置不要超过一个月。 其他
注意事项1. 过多的模板 DNA 容易导致非特异性的 PCR 产物。 2. 对于模板的使用给予建议：以哺乳动物和大肠杆菌的基因组 DNA 为例：试剂名称加入量哺乳动物基因组 DNA0.1-1 μg大肠杆菌基因组 DNA10-100 ng
使用方法反应体系配制前准备： 1. 室温或 4℃融解并混匀反应所需的各种溶液。并放置于冰浴上 或冰盒内。建议反应液体分装使用，避免反复冻融； 2. 参考下表设置荧光定量反应体系,建议荧光定量反应体系的配 制在冰浴或在冰盒上进行：组分加入体积 / 人份终浓度5×Epitech HS Taq DNA Polymerase Buffer10 μL1×Epitech HS Taq DNA Polymerase0.5 μL0.05 U/μLdNTPs0.5 μL0.25 mMPrimer-probe MixX μL——模板X μL——ddH₂OTo 50 μL——终体积50 μL注：a.引物、探针以及模板的用量可自行调整。3. 用移液器轻轻吹打混匀或轻微 Vortex 混匀，室温离心数秒， 使液体积聚于管底； 4. 各设置好的 PCR 反应管置于 PCR 仪上，开始 PCR 反应。 反应程序 荧光定量 PCR步骤名称温度时间循环预变性95 °C10 min1变性ᵃ94 °C15 s40-45退火 + 延伸ᵃ60 °C40 s（收集荧光）——a. 反应条件根据引物探针和模板情况可自行设置。实验用例 本实验以结直肠癌相关基因 SDC2 基因和 TFPI2 基因作为检 测的靶基因，ACTB 作为内参基因为例检测结果：(模板浓度为 10ng/μL)