HiFi Seq Hotstart DNA 聚合酶

产品介绍

HiFi Seq Hotstart DNA polymerase 是通过基因工程改造的工程酶，在无需辅助蛋白及额外的 DNA 结合功能域的条件下提高了对 DNA 模板的亲和力。相比于其他野生型的 B 族 DNA 聚合酶，HiFi Seq Hotstart DNA 聚合酶强大的持续合成能力能够显著的提高扩增产物量、扩增速率以及灵敏度，同时长片段扩增和复杂模板的扩增能力（高 AT 或者高 GC 模板）也有明显的提高。 HiFi Seq Hotstart DNA polymerase 有 5’→3’聚合酶活性和 3’→5’外切酶活性（校对活性），无 5’→3’外切酶活性。强大的 3’→5’ 外切酶活性保证了 DNA 扩增过程中的准确率，HiFi Seq Hotstart DNA polymerase 保真性是野生型 Taq DNA 聚合酶的 100 倍，是 其他 B 族 DNA 聚合酶的 10 倍。组分表FP1509106 组分100U500U存储温度FP1509106A HiFi Seq Hotstart DNA polymerase (1U/μL)100 μL500 μL-20℃FP1509106B 5×HiFi seq buffer1.0 mL5×1.0 mL-20℃FP1509106C10×Enhancer500 μL2×1.25 mL-20℃适用范围 NGS DNA 文库的富集、基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变的分析。
使用方法 1. 提前取出 5×HiFi seq buffer、10×Enhancer 置于室温融化，如果有沉淀析出，请彻底混匀溶解后使用，HiFi Seq Hotstart DNA polymerase 置于冰上备用。2. 按照下表配制 PCR 体系，注意此步骤需于冰浴中操作。组分体积（μL）5×HiFi seq buffer1010×Enhancer510mM dNTP1HiFi Seq Hotstart DNA polymerase1Primer(each 5μM)2-5templates—ddH2O—Total501) 反应体系可以设置在 10-50μl 之间，试剂使用量可以按照比例调整，不推荐使用 > 50μl 体系；2) 1×HiFi seq buffer 包含 2.5mM Mg²⁺(1×)，如果体系需要更高浓度的 Mg²⁺可以额外的添加；3) 在初次测试时，50μl 反应体系建议基因组模板使用量为 10-100ng，稍微复杂模板使用量为 0.1-1ng。反应程序3. 按下表设置 PCR 仪反应程序，开启热盖，温度设置于 105℃。1) 预变性时间 95℃ 3min 对于常规模板是足够的，对于 GC≧70% 模板建议将预变性时间延长至 5min； 2) 体系中高盐离子浓度会影响 DNA 溶解，为保证复杂 GC 模板 能够完全变性，建议将变性温度调整到 98℃。高盐 buffer 同时也 会影响引物的退火，优化后的退火温度要略高于常规的 PCR 体 系，初次反应建议使用 56℃为退火温度,若反应不理想,则可以每 调整 3℃测试一次的方法来确定最适的退火温度；3) 两步法扩增程序，建议退火/延伸范围 65-68℃，延伸时间按 30-60 sec/kb 计算； 4) 常规条件下目的片段≦1kb，延伸时间按 15sec/kb 计算，当目 的片段>1kb，或者要提高产物量，延伸时间按 30 sec/kb 计算； 5) 为获得较高的保真性，建议扩增循环数≦25cycles，扩增循环 数越高，错配率越高。