苏木素-伊红 (HE)高清恒定染色试剂盒 (高清恒染)

产品介绍

苏木素 (Hematoxylin)和伊红 (Eosin)联合染色简称HE染色，是病理学常规制片中最基本的染色方法，应用极其广泛，苏木精是从原产于中南美州的洋苏木中提取出来的浅黄褐色的结晶，是一种碱性染色剂，它在被氧化后生成苏木素，同媒染剂 (常用的是三价的铝或盐铁)一起使用，能够使细胞核染色。在病理诊断、教学和科研工作中，常用HE染色对正常组织和病变组织进行形态结构观察，可确定或鉴别病变组织、细胞中出现的某些异常物质与特殊成分，而需要采用的特殊染色方法、酶组织化学方法、免疫组织化学方法等也均是在观察HE染色组织切片的基础上进行的，在HE染色的组织切片中细胞核呈蓝色，细胞浆呈红色，二者形成鲜明的对比，易于观察分析。苏木素-伊红 (HE)高清恒定染色试剂盒 (高清恒染)由预染液、苏木素染色液、分化液Ⅰ、分化液Ⅱ、返蓝液、伊红染色液组成。其中苏木素染色液采用雷根自研配方，由进口的高纯度苏木精、氧化剂等组成，不含氧化汞、甲醇等有害物质，对细胞核染色效果好。本产品可用于HE常规切片染色中显示组织形态结构。本产品特点是着色牢固，长期保存不褪色，1~2500张切片染色效果基本一致，利于HE染色标准化统一化。该产品仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。染色原理：
1、细胞核染色原理：苏木素为碱性天然染料，可使细胞核着色，细胞核内染色质的成分主要是DNA，在DNA双螺旋结构中两条核苷酸链上的磷酸基向外，使DNA双螺旋的外侧带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木素碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。苏木素在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。
2、细胞浆染色原理：伊红是一种化学合成的酸性染料，在一定条件下可使细胞浆着色，细胞浆的主要成分是蛋白质，为两性化合物，细胞浆的染色与染液的pH值密切相关，当染色液pH值在胞浆蛋白质等电点 (4.7-5.0)以下时，胞浆蛋白质以碱式电离，则细胞浆带正电荷，就可被带负电荷的酸性染料染色。伊红在水中离解成带负电荷的阴离子，与胞浆蛋白质带正电荷的阳离子结合，使细胞浆着色，呈现红色。
3、分化作用：染色后，用某些特定的溶液将组织过多结合的染色剂脱去，这个过程称为分化作用，所用的溶液称为分化液。在HE染色中常用0.5-1%盐酸乙醇作为分化液，因酸能破坏苏木素的醌型结构，使组织与色素分离而退色。大多数组织经苏木素染色后，必须用盐酸乙醇分化，使细胞核过多结合的苏木素染料和细胞浆吸附的苏木素染料脱去，再进行伊红染色，才能保证细胞核与细胞浆染色的分明。
4、返蓝作用：分化之后，苏木素在酸性条件下处于红色离子状态，呈红色；在碱性条件下处于蓝色离子状态，呈蓝色。组织切片经酸性乙醇分化后呈红色或粉红色，立即用水除去组织切片上的酸而中止分化，再用弱碱性水使苏木素染上的细胞核呈现蓝色，这个过程称为返蓝作用或蓝化作用，另外用自来水 (尤其是温水)浸洗也可使细胞核返蓝，但所需时间较长。H1508526Component6×100 mL6×500 mLStorageH1508526A预染液100 mL500 mLRT. Store in the dark.H1508526B苏木素染色液100 mL500 mLRT. Store in the dark.H1508526C分化液Ⅰ100 mL500 mLRT.H1508526D分化液Ⅱ100 mL500 mLRT.H1508526E返蓝液100 mL500 mLRT.H1508526F伊红染色液100 mL500 mLRT. Store in the dark.自备材料：
1、乙醚-乙醇混合固定液、4%多聚甲醛、自来水或蒸馏水
2、环保脱蜡液、环保透明液、系列乙醇、中性树胶或环保封片胶操作步骤(仅供参考)：(一)石蜡切片染色
1、切片脱蜡至水①环保脱蜡液脱蜡2次，每次5-10min。②无水乙醇2次，每次1-3min。③95%乙醇: 1min。④90%乙醇: 1min。⑤80%乙醇: 1min。⑥自来水或蒸馏水冲洗: 1min。
2、染色①预染液处理: 30s。②苏木素染色液染色: 5min。③自来水或蒸馏水冲洗: 2min。④分化液Ⅰ分化: 15s。⑤分化液Ⅱ分化: 5s。⑥自来水或蒸馏水冲洗: 2min。⑦返蓝液返蓝: 1min。⑧自来水或蒸馏水冲洗: 1min。⑨80%乙醇: 1min。⑩伊红染色液染色: 10s。
3、脱水、透明、封固①95%乙醇: 1min。②无水乙醇2次，每次1min。③环保透明液透明2次，每次2min。④中性树胶或环保封片胶封片。(二)冰冻切片染色
1、-20℃保存的冰冻切片，室温静置复温待组织稍微晾干后，用甲醇固定1min；新鲜的冰冻切片室温静置数分钟，待OCT包埋剂完全晾干以后开始染色，防止脱片。
2、自来水冲洗5s。
3、预染、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤，作用时间应相应缩短。(三)细胞染色
1、细胞爬片，经4%多聚甲醛固定5-10min。
2、自来水冲洗2次，每次2min。
3、蒸馏水冲洗2次，每次2min。
4、预染、染色、脱蜡、透明、封固步骤同石蜡切片的染色步骤，作用时间应相应缩短。(四)机染操作步骤同石蜡切片染色。染色结果：细胞核呈蓝色；细胞质、肌纤维、胶原纤维、甲状腺胶质等呈深浅不一的红色；角蛋白、红细胞等呈明亮的橙红色。
注意事项：
1、切片脱蜡应尽量干净；温度低时，可在恒温箱60-70℃处理。
2、使用前应仔细阅读说明书，并在产品使用期限内使用。
3、系列乙醇应经常更换新液。
4、产品需按照存放温度保存。如果保存温度低于15℃，苏木素染液中可能有明矾结晶析出，一般不影响产品质量，但可能会减少染色切片数量。如果保存温度高于30℃，会加快苏木素的氧化速度，导致染色能力下降，同时伊红染液的挥发程度会加快。
5、酸性乙醇分化时间应根据切片厚薄、组织类别以及新旧而定，另外分化后自来水冲洗时间应该足够，以便彻底清洗酸。
6、建议配套使用环保脱蜡液、环保透明液和环保封片胶进行实验。
7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。