核酸免提取试剂盒

产品介绍

本产品采用了具有专利配方的缓冲体系，包含了直接裂解DNA或RNA病毒的裂解液B1和裂解液B2，适用于从各种血液及组织病料样本中直接进行DNA或RNA病毒的分子检测。整个提取过程不包含蛋白酶消化，高温孵育，去蛋白及其它杂质的过程，无需有机溶剂抽提，无需无水乙醇沉淀，简便、快捷，而且质量稳定可靠。产品组分及储存条件：N1508469Components50TStorageN1508469A裂解液B15.5mlRTN1508469B裂解液B25.5mlRT产品特点：简单快速：无需液氮，5min即可完成病毒DNA或RNA提取。普适性强：适用于各种组织病料、血液等样本。
注意事项：1. 试剂盒不具备独立的体外诊断作用，不可作为诊断试剂。2.应严格控制组织病料的取样量，建议用量为5-10mg(一颗到半颗大米大小)，取样量太多容易造成假阴性结果。具体情况参考下图：实验流程：1. 组织类样本：取少量样品 (5-10mg，一颗到半颗大米大小) 于1.5ml的离心管中，加入100μl裂解液B1，确保缓冲液可以完全覆盖样品，用组织研磨器充分研磨。研磨结束后室温放置5min，然后加入100μl裂解液B2，震荡混匀，10,000rpm离心2min。离心结束后，小心吸取100μl上清液于另一干净的1.5ml离心管中作为模板使用，使用量为PCR反应体系的1/10（例如50μlPCR反应体系，模板使用量为5μl）。注意：必须现处理现用。2. 血液类样本：取组织匀浆液、血浆或血液 (新鲜抗凝全血) 20μl (或10μl) 加入到100μl裂解液B1中震荡混匀后室温放置5min，然后加入100μl裂解液B2，震荡混匀，10,000rpm离心2min。离心结束后，小心吸取100μl上清液于另一干净的1.5ml离心管中作为模板使用，使用量为PCR反应体系的1/10 (例如50μlPCR反应体系，模板使用量为5μl)。注意：必须现处理现用。3. 结果检测：3.1 qPCR扩增反应：3.1.1 推荐使用qPCR扩增体系：组分体积ddH₂OUp to 50μl直扩qPCR反应液38μl直扩HotStart Taq酶2μl直扩qPCR引物探针5μl模板5μl试剂全部加好后，混匀后瞬时离心，将所有试剂收集到管底。直扩qPCR 引物探针配制 (建议)：引物探针母液直扩qPCR引物探针mix中终浓度单人份用量Primer F (40 pmol/μl)4 pmol/μl5μlPrimer R (40 pmol/μl)4 pmol/μl5μlTaqman Probe (20 pmol/μl)2 pmol/μl5μl3.1.2 qPCR反应程序：步骤温度时间循环数195°C3 min1 cycle295°C60°C (此步收集荧光)15 sec30 sec40 cycles根据引物 (探针) 设计确定退火温度。3.2 RT-qPCR扩增反应：3.2.1 推荐使用RT-qPCR扩增体系：组分体积ddH₂OUp to 50μl直扩RT-qPCR反应液38μl直扩RT-qPCR酶混合液2μl直扩RT-qPCR引物探针5μl模板5μl试剂全部加好后，混匀后瞬时离心，将所有试剂收集到管底。直扩RT-qPCR引物探针配制 (建议)：引物探针母液直扩RT-qPCR引物探针mix中终浓度单人份用量Primer F (40 pmol/μl)4 pmol/μl5μlPrimer R (40 pmol/μl)4 pmol/μl5μlTaqman Probe (20 pmol/μl)2 pmol/μl5μl3.2.2RT-qPCR反应程序：步骤温度时间循环数150°C10 min1 cycle295°C3 min1 cycle395°C60°C (此步收集荧光)10 sec30 sec40 cycle根据引物(探针)设计确定退火温度。