链亲和素

产品介绍

介绍：链亲和素（SA）是阿维丁链霉菌（Streptomyces avidinii）表达的一种小分子蛋白。本制品为127AA最佳核心结构，每分子SA结合4个生物素分子，国际比活性12~15U/mg。SA与禽类亲和素（Avidin，AV）相比特异性更强，与生物素结合后半衰期长达6h，而AV半衰期仅为1h。由于SA不含糖基且等电点接近中性，因此SA在检测应用中具有比AV更低的非特异性背景。

用途：本制品已广泛应用于制备SA-偶联酶制剂（如SA-HRP，SA-AP等），SA-偶联荧光素（即荧光染料，如SA-FITC，SA-Cy2，SA-Cy3等）、SA-偶联磁珠等，进而参与酶联免疫吸附检测（ELISA）、免疫组化、亲和色谱填料、含StrepTagII标签（8-AA寡肽）的蛋白纯化、生物传感器、生物纳米微球、预靶向制药研究、生物芯片被料等生物技术领域。

优点：高亲和力，高偶联效率。

注意事项：

1.冻干粉溶解后应避免反复冻融，建议分装成小包装后分别冻存。

1.若用于胶体金，最好调节pH或透析后使用。溶解后立即使用效果最好，不能4℃长期存放。

2.若用于ELISA包板，胶体金烘金，硝酸纤维素膜上用SA划线后需要烘干保存，包被液或缓冲液中需加入20%蔗糖作为活性保护剂。

【操作步骤简述】

一、微孔板包被

1、用碳酸钠缓冲溶液（pH 9.6）溶解冻干粉，将浓度稀释成3-10ug/ml（客户可设定梯度进行实验）

注意：该重组链霉亲和素 C 端含 His-Tag 标签，pI：6.42，包被不建议使用中性缓冲液

2、用移液器吸取100ul/孔，4℃过夜包被或者37℃包被2h；

3、洗涤：倒尽板孔中液体，加200ul洗涤液，静放三分钟，反复三次，最后将反应板倒置在吸水纸上，使孔中洗涤液流尽，扣干

4、后续进入封闭、洗涤、抗原抗体结合流程

若不立即进入下游实验，包被板需要进行烘干保存时。包被前，将包被液中加入20%蔗糖作为活性保护剂。

二、SA偶联磁珠

2.1 NHS 活化

1、充分混匀磁珠后，取100μl PangoBeads COOH 磁珠到1.5 ml 离心管中，置于磁性分离上，待固液分离后去除上清液；

2、取200μl MES溶液（25mM，pH 5.0）加入到离心管中，置于磁性分离上，待固液分离后去除上清液。重复该步骤1 次； **3、迅速加入新配制的50μl EDC 溶液和50μl NHS 溶液 （均为50mg/ml， 以上述MES 配制）到装有磁珠的离心管中，漩涡混匀使磁珠充分悬浮，室温下垂直混合30min； **4、反应结束后，加入100μl 上述 MES 溶液洗涤 2 次；（活化状态不宜长时间保存， 建议立即进行偶联）

2.2 蛋白偶联

1、将离心管置于磁性上，分离去除上清液，加入100μl蛋白溶液（25 mM MES，pH 5.0） 轻柔地混匀；（蛋白浓度在0.1-2.0mg/ml）

2、在室温下垂直混合反应2h，或在4℃条件下垂直混合过夜；

3、反应结束后将离心管置于磁分离架上，磁性分离去除上清液，加入1ml乙醇胺溶液 （3M，pH9.0）洗涤磁珠 2 次；

4、加1ml乙醇胺溶液（3M, pH 9.0）于离心管中，涡旋30s，将离心管置于垂直混合 仪中室温反应1-2h；

5、反应结束后，将离心管置于磁力架上，待固液分离后移除上清液，然后加入100μl 纯化水轻柔涡旋 30s，磁吸分离，重复该步骤 1 次；

6、加入适量的保存液（可根据需要来确定保存溶液的加入量，以调整偶联配体磁珠的加入适量的保存液（可根据需要来确定保存溶液的加入量，以调整偶联配体磁珠的浓度）保存于4°，如果固定的生物配体稳定，可以在保存溶液中加入0.02%（W/V）叠氮化钠作为抑菌剂。