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基 因 型F- φ80 lacZ∆M15 ∆(lacZYA-argF)U169 recA1 endA1 hsdR17(rk-, mk+) phoA supE44 λ-thi-1 gyrA96 relA1 tonA简 要 说 明 JM330菌株(即DH5α T1 Phage Resistant)，来源于DH5α菌株。在DH5α大肠杆菌基因组中引入tonA，赋予其抗噬菌体T1,T5的能力，即为JM330。JM330菌株最大的特点是其可以在体内特异性降解甲基化质粒模板，广泛应用于各种DNA定点突变试验中。JM330菌株缺失核酸内切酶 (endA1)和重组酶(recA1)，提高了质粒DNA的产量和质量； lacZΔM15的存在使JM330可用于蓝、白斑筛选。生物开发的JM330感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率>1×109cfu/μg DNA。操 作 说 明1. JM330感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的DNA（例如：Dpn I消化产物等）并用手拨打EP管底混匀，冰中静置25分钟。2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏70分钟。4. 5000 rpm离心1分钟收集菌体，留取50 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上。5. 将平板倒置放于37℃培养箱至少15小时。注 意 事 项1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化。插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。2. JM330可以对未被Dpn I降 解掉的质粒模板进行进一步的降解，因此可以保证定点突变具有更高的阳性率。3. 转化高浓度的质粒或Dpn I消化产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

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