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基 因 型F -ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB (KanR,TetR) pLysS CamR简 要 说 明 Origami B (DE3) pLysS菌株携带pLysS质粒，具有氯霉素抗性。pLysS可表达T7溶菌酶（T7溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌，还可与T7 RNA聚合酶结合抑制其转录活性，进而降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达），适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。Origami B (DE3) pLysS菌株表达突变的硫氧还蛋白还原酶 (thioredoxin reductase) (trxB)和谷胱甘肽还原酶 (glutathione reductase) (gor)，这两个酶是还原途径的关键酶，突变后有利于形成正确折叠的含有二硫键的蛋白，增强蛋白的可溶性。 此外，该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达，具有氯霉素、卡那霉素和四环素抗性，不能用于具有氯霉素，卡那霉素抗性质粒的表达。Origami B (DE3) pLysS感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达108 cfu/μg DNA 操 作 说 明1. Origami B (DE3) pLysS感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒，并用手拨打EP     管底混匀，冰中静置25分钟。2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰中并静置2分钟，晃动会降低转化效率。3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。4. 5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。注 意 事 项1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。2. 混入质粒时应轻柔操作，转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。3. 诱导时，IPTG浓度可选（0.1-2 mM均可）。4. 为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。5. 具有氯霉素，卡那霉素和四环素抗性，不能用于具有氯霉素，卡那霉素和四环素抗性质粒的表达。

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