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产品描述：

SMCy5.5 is a SMCy dye (ex. 638 nm; em. 705 nm). The high brightness of SMCy5.5 allows for effective tracking and imaging of lipid droplet exchange between adipocytes. SMCy5.5 can be used for lipid droplet labeling studies.

体外研究：

指南 (以下是我们推荐的方案，本方案仅提供指南，应根据您的具体需要进行修改)。
1) 细胞接种：在脂质滴染色前 1 天，将 KB 细胞以 1.5×106 个细胞的密度接种于 T-25 培养瓶中。
2) 染色前处理：次日移除培养基，用 PBS 冲洗贴壁细胞 2 次。
3) 染料孵育：将细胞分别与 SMCy3.5 或 SMCy5.5 (在含 0.5% DMSO 的 OptiMEM 中配置，浓度为 1 μM) 在 37°C、90% 湿度、5% CO2 条件下孵育 3 h。
4) 染料清除：孵育后，弃去含染料的培养基，用 PBS 冲洗 KB 细胞 2 次，加入生长培养基以确保充分去除过量染料，随后再次用 PBS 冲洗。
5) 细胞处理：将细胞胰酶消化后，以 15,000 rpm 离心 3 min，沉淀用生长培养基重悬；将细胞悬液再次离心，沉淀用生长培养基重悬。
6) 细胞混合与接种：将两种细胞悬液按等量充分混合 (总细胞数约 6×106 个)，然后以 1×105 个细胞/孔的密度接种于 IBiDi chambered coverglass 中。
7) 细胞核染色：成像前，用 Hoechst (5μg/mL) 孵育细胞 15 min 进行细胞核染色。
固定与洗涤：用 4% 多聚甲醛固定细胞 5 min，随后用 HBSS 洗涤 3 次。
8) 成像时间：在细胞贴壁后 18 h 和 48 h 进行成像。
9) 成像设备与参数：使用 Nikon Ti-E 倒置显微镜；显微镜设置如下：Hoechst (激发光 405 nm，发射光 510 nm)、SMCy3.5 (激发光 532 nm，发射光 600 nm)、SMCy5.5 (激发光 638 nm，发射光 705 nm)。
10) 图像记录与处理：使用 NIS Elements 软件记录图像，随后用 Icy 软件进行处理。

参考文献：

1. Collot M, et al. Ultrabright and Fluorogenic Probes for Multicolor Imaging and Tracking of Lipid Droplets in Cells and Tissues. J Am Chem Soc. 2018 Apr 25;140(16):5401-5411.

保存条件：

-20°C, 避光

配置溶液浓度参考：

	1mg	5mg	10mg
1 mM	1.442 ml	7.208 ml	14.417 ml
5 mM	0.288 ml	1.442 ml	2.883 ml
10 mM	0.144 ml	0.721 ml	1.442 ml
50 mM	0.029 ml	0.144 ml	0.288 ml

注意：

部分产品我司仅能提供部分信息，我司不保证所提供信息的权威性，仅供客户参考交流研究之用。

参考文献

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