蛋白定量方法如何选择？_产品介绍_上海源叶生物科技有限公司

BCA、Bradford、Lowry：蛋白定量为什么会有不同答案？

同一样品，BCA 测 1.2 mg/mL、Bradford 测 0.9 mg/mL——不是谁错了，是三种方法「看」蛋白的位点不同，受干扰物影响也不同。

什么是蛋白定量？

蛋白定量是用比色或荧光法测定样品中蛋白质浓度，常用作 Western Blot、酶活、纯化收率等实验的上样量归一化依据。

三种方法的显色原理

方法	显色基础	关键特点
Lowry	双缩脲+福林酚氧化铜	灵敏但步骤多、易干扰
BCA	双缩脲+BCA 螯合铜(bicinchoninic acid)	兼容去垢剂、受热稳定
Bradford	考马斯亮蓝 G-250 结合	快速、但受去垢剂强干扰

BCA 与 Lowry 都基于「铜与肽键反应」，对碱性氨基酸敏感；Bradford 靠染料结合，对 Arg/Lys/His 丰富的蛋白偏色更强。所以不同蛋白组成会得到不同吸光度。

为什么结果会「打架」

要点	说明
去垢剂	SDS/Triton 干扰 Bradford，却多被 BCA 兼容
缓冲液成分	还原剂(如 DTT)会抑制 BCA 显色
蛋白组成	富含碱性氨基酸的蛋白在 BCA 下信号偏强
标准品不匹配	用 BSA 标曲测抗体蛋白，本就存在系统偏差

结论：选方法看样品缓冲液，且标准品尽量接近待测蛋白类型。用错标准品，数值再「准」也偏离真实浓度。

常见误区

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常见问题 FAQ

Q：三种方法核心差别？

A：Lowry/BCA 基于铜-肽键反应，Bradford 基于染料结合；显色位点与干扰物不同导致数值差异。

Q：去垢剂影响哪个方法？

A：Bradford 受 SDS 等强干扰，BCA 多兼容去垢剂但怕强还原剂。

Q：为什么用 BSA 标曲测抗体会偏？

A：抗体蛋白组成与 BSA 不同，显色响应有差异，构成系统偏差。

Q：还原剂会影响定量吗？

A：会，DTT/β-巯基乙醇等可抑制 BCA 显色，需先去除或选兼容配方。

Q：该选哪种方法？

A：含去垢剂裂解液优先 BCA；纯蛋白快速筛查可用 Bradford；均须标准品匹配。

Q：定量结果能直接用于上样吗？

A：可作为归一化参考，但建议平行内参验证，尤其珍贵样品。

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