微生物培养基原料:从氮源到凝固剂的一站式配制方案
胰蛋白胨 酵母浸出粉 牛肉浸膏 大豆蛋白胨 琼脂粉 植物凝胶 即用型培养基
同样一张 LB 平板,菌落长得快慢、形态是否典型,差异往往不在配方而在原料级别——胰蛋白胨的酶解程度决定可利用肽段比例,酵母浸出粉的维生素保留率决定生长因子供给,琼脂粉的凝胶强度决定平板是否耐划、易脱水。源叶生物按 BR / 精制级 / 微生物培养级 三档供应培养基原料,并配套无菌即用型成品培养基,覆盖从"自配一升"到"开瓶即用"的全部场景。
氮源·碳源·无机盐·凝固剂等
蛋白胨·浸出粉·浸膏·凝固剂
BR / 精制级 / 微生物培养级
上海·北京·廊坊·珠海·重庆·武汉
一、培养基六大组分与源叶对应原料
| 组分 | 功能 | 源叶代表原料 | 添加量 |
|---|---|---|---|
| 氮源 | 提供氨基酸、多肽、核苷酸 | 胰蛋白胨 S33810、蛋白胨 S33805、大豆蛋白胨 S33806 | 5–20 g/L |
| 碳源 | 供能并提供碳骨架 | D(+)-无水葡萄糖 S11022、麦芽浸粉 S25903 | 2–20 g/L |
| 生长因子 | 补充 B 族维生素与促生长物 | 酵母浸出粉 S33822、牛肉浸膏 S25835 | 1–10 g/L |
| 无机盐 | 渗透压、pH 缓冲、酶辅因子 | 氯化钠、磷酸氢二钾、硫酸镁(AR/GR) | 按配方 |
| 凝固剂 | 固化为平板或斜面 | 琼脂粉 S30874、植物凝胶 S30511 | 6–25 g/L |
| 水 | 溶剂,离子残留干扰结果 | 建议用蒸馏水或去离子水 | 定容 1 L |
二、氮源原料怎么选:六类原料的定位差异
氮源是成本占比最高、批次差异影响最大的部分。六类原料的氨基酸谱、维生素含量与澄清度各不相同,应按菌种与目的组合使用。
胰蛋白胨 Tryptone
S33810(培养级)· S33809(精制级)· S31316
牛骨肉酶解提取的浅黄色粉末,色浅、易溶、透明无沉淀,LB/TB/SOC 的核心氮源。精制级高压后无沉淀,适合蛋白表达与发酵。
蛋白胨 Peptone
S33805(牛骨·培养级)· S33804(牛骨·精制级)· S26075(BR·鱼骨肉)
肉、骨骼经酸或酶水解干燥制成,富含有机氮并含维生素与糖类,为通用型氮源。牛骨来源批次稳定,鱼骨肉来源成本更优。
大豆蛋白胨 Soy peptone
S33806(精制级)· S25902(BR)· V32407
以大豆粕为原料的植物源氮源,富含胨、多肽与氨基酸,溶解度好、颜色浅,可规避动物源合规风险,是生物医药发酵与酶制剂生产首选。
酵母浸出粉 Yeast extract
S33822(培养级)· S33821(精制级)· S24010
啤酒或面包酵母自溶酶解后喷雾干燥而成,含氨基酸、肽、水溶性维生素与碳水化合物,是培养基 B 族维生素的主要来源。
牛肉浸膏 Beef extract
S25835 · S33824(精制级)
新鲜牛肉消化、过滤、浓缩制成,富含肌酸、多肽、核苷酸与维生素,含硫氨酸较多,用于补充蛋白胨氮源不足,高档发酵培养基常用。
麦芽浸粉 Malt extract
S25903(100g / 250g / 500g)
优质大麦芽抽提而成,富含碳水化合物、肽类与嘌呤嘧啶,是真菌与酵母菌的专用营养源,常用于霉菌、放线菌培养与产孢。
三、凝固剂怎么选:琼脂粉与植物凝胶对比
| 对比项 | 琼脂粉 S30874 / S33010 | 植物凝胶 Phytagel S30511 |
|---|---|---|
| 来源与强度 | 红藻多糖;1.5% 浓度 800–1200 g/cm²(S33010 达 1300) | 假单胞菌发酵多糖;高韧性、无色透亮 |
| 工作浓度 | 6–25 g/L,常规 1.5–2% | 微生物培养基最高 10 g/L |
| pH 要求 | 中性,pH < 4 无法凝结 | 最适 pH 5.8,需 Ca²⁺、Mg²⁺ |
| 适用 | 常规平板、斜面、菌种保藏 | 高透明观察、污染早筛 |
琼脂粉不凝固的四类原因:① pH 偏酸(<4)水解;② 添加量不足或倒板前未摇匀;③ 灭菌温度过高、时间过长;④ 加热溶解不充分。夏季可适当提高用量。
四、经典配方速查(每升用量)
五、不想自配?源叶即用型成品培养基
LB 培养基 R20125
液体 500 mL|大肠杆菌常规扩增、分子克隆
TB 培养基(无菌即用型) R20143
液体 500 mL|高密度培养、重组蛋白表达;粉剂 R20142 / R20141
SOB / SOC 固体培养基粉剂 R20139 / R20140
干粉 1 L|感受态细胞制备与转化后复苏,提高转化效率
YPD / YEPD 培养基 R20146
液体 500 mL|酿酒酵母、毕赤酵母常规培养
Minimal SD Base S34922
2–8℃ 保存|酵母缺陷型筛选,配 DO Supplement;含琼脂版 S34919
硅酸盐细菌培养基 S36342
23.6 g/L|利用硅酸盐的微生物分离培养(116℃ 灭菌 30 min)
六、自配培养基的关键控制点
1加约 2/3 体积蒸馏水,加热搅拌至完全溶解(琼脂粉需煮沸);
2冷却至室温调 pH(灭菌后 pH 约降 0.1–0.2),再定容分装;
3121℃ 灭菌 15–20 min,含糖培养基建议 115℃ 灭菌 20 min;
4冷却至 50–60℃ 加入过滤除菌的热敏成分,摇匀倒板后吹干冷凝水。
2冷却至室温调 pH(灭菌后 pH 约降 0.1–0.2),再定容分装;
3121℃ 灭菌 15–20 min,含糖培养基建议 115℃ 灭菌 20 min;
4冷却至 50–60℃ 加入过滤除菌的热敏成分,摇匀倒板后吹干冷凝水。
三个最常见失误:
① 葡萄糖与磷酸盐共同高温灭菌引发美拉德反应导致褐变 → 分开灭菌或降温;
② 琼脂粉未充分煮沸溶解、倒板前未摇匀 → 平板凝固不均;
③ 蛋白胨与酵母浸出粉均易吸潮 → 开封后密封干燥保存,称量后立即盖紧。
① 葡萄糖与磷酸盐共同高温灭菌引发美拉德反应导致褐变 → 分开灭菌或降温;
② 琼脂粉未充分煮沸溶解、倒板前未摇匀 → 平板凝固不均;
③ 蛋白胨与酵母浸出粉均易吸潮 → 开封后密封干燥保存,称量后立即盖紧。