类器官培养与抑制剂:从基质胶到信号调控的完整试剂清单
Y-27632 A 83-01 CHIR-99021 SB 202190 胶原酶Ⅳ型 类器官基质胶
同一个类器官体系,别人能连续传 20 代、形态稳定,你传到第 3 代就中心坏死、分化失控——差异通常不在细胞,而在三层试剂是否配套:支架层给不给得起基底膜信号,基础层缓冲与营养稳不稳,调控层的抑制剂浓度与添加时机对不对。源叶生物按支架 · 基础 · 调控三层供应类器官培养试剂,基质胶、核心小分子抑制剂、代谢添加物与组织解离酶可在同一订单配套完成。
一、类器官培养体系的三层结构
| 层级 | 解决什么问题 | 源叶对应产品 | 典型异常信号 |
|---|---|---|---|
| 支架层 | 三维支撑、极性建立、机械信号 | UltraBio 基质胶 R43105、标准型 R29991、Matrigel R32345、仿生基质 R43387 | 不贴壁、铺展成单层 |
| 基础层 | 渗透压、缓冲体系、抗感染屏障 | 10×DPBS R32018、双抗 R20016、胰酶消化液 R33089、无血清冻存液 R22368 | pH 快速变黄、污染 |
| 调控层 | 干性维持、分化方向、凋亡抑制 | Y-27632 S41871、A 83-01 S81090、CHIR-99021 S45135、SB 202190 S80390 | 传代后凋亡、过早分化 |
二、支架层:7 款基质胶与仿生基质怎么选
选基质胶只看三个变量:蛋白浓度(决定胶强度与支持力)、生长因子水平(需精确控信号时用低生长因子型)、是否含酚红(影响荧光成像背景)。
| 货号 | 产品名称与规格 | 选型要点 | 储存 |
|---|---|---|---|
| R43105 | UltraBio 基质胶 低生长因子·含酚红 | 低生长因子型,适合需外源精确控信号的分化实验 | -80℃,36 个月 |
| R43107 | UltraBio 基质胶 高浓度·低生长因子·含酚红 | 高蛋白浓度,适用类器官包裹、体内成瘤、长期三维培养 | -80℃,36 个月 |
| R45432 | UltraBio 基质胶 高浓度·不含酚红 | 高浓度无酚红,适配免疫荧光与共聚焦成像 | -80℃,36 个月 |
| R43106 | UltraBio 基质胶 标准浓度·含酚红 | 常规包被与铺胶,通用型首选 | -80℃,36 个月 |
| R29991 | 标准型基质胶 不含 LDEV·不含酚红 | 无乳酸脱氢酶病毒,适合背景要求高的类器官建系 | -20℃,36 个月 |
| R32345 | Matrigel 基底胶 | 经典基底膜基质,支持上皮、内皮、肝细胞贴壁与分化 | -20℃,12 个月 |
| R43387 | 仿生基质冻干粉 无动物源 | 成分限定、无动物源与交联剂,可嵌入 RGD 粘附序列 | 2–8℃,24 个月 |
基质胶操作铁律:Matrigel 在 10℃ 以上即开始成胶,解冻、分装、铺板全程必须冰上操作,枪头、离心管、培养板均需预冷。溶解建议 4℃ 冰箱内冰上过夜,禁止 37℃ 速融(会造成局部成胶、批内均一性报废)。分装后 -80℃ 或 -20℃ 保存,严禁反复冻融。
三、调控层:4 种核心小分子抑制剂
决定类器官成败的正是这一层,四种抑制剂分工明确:Y-27632 管存活(抗凋亡,接种首日加)、CHIR-99021 管干性(激活 Wnt)、A 83-01 管不分化(阻断 TGF-β)、SB 202190 管应激(抑制 p38 MAPK)。价格为官网参考价,以下单时页面为准。
| 货号 | 名称 / CAS | 靶点与纯度 | 规格 | 工作浓度 / 适用 |
|---|---|---|---|---|
| S41871 | Y-27632 CAS 146986-50-7 |
ROCK-I / II 抑制剂 纯度 99.69% |
5 mg / 25 mg / 100 mg | 10 μM 仅接种·复苏首日添加 |
| S81090 | A 83-01 CAS 909910-43-6 |
ALK5/4/7 抑制剂 IC50 12/45/7.5 nM |
5 mg / 10 mg / 50 mg | 0.5–2 μM 肝·前列腺·乳腺 |
| S45135 | CHIR-99021 CAS 252917-06-9 |
GSK-3α/β 抑制剂 IC50 10/6.7 nM,≥98% |
5 mg / 25 mg / 100 mg | 3 μM 肾·视网膜·肠 |
| S80390 | SB 202190 CAS 152121-30-7 |
p38 MAPK 抑制剂 靶向 p38α/β,纯度 99% |
5 mg / 25 mg /100 mg | 10 μM 胃肠道·乳腺 |
不想自己配母液?源叶 MedMol 提供即用型 DMSO 预溶液:A 83-01(10 mM,T94574)、N-乙酰半胱氨酸(10 mM,T92269)、前列腺素 E2(10 mM,T93899),-80℃ 冰袋低温运输,开瓶即用。注意 DMSO 溶液态稳定性低于干粉,务必分装冻存、一次性用完。
四、代谢与信号添加物:5 种
抑制剂负责"关通路",添加物负责"供底物、抗氧化、模拟体内微环境"。胃肠与肝脏类器官尤其依赖 Gastrin I 与烟酰胺延长存活,缺这两项,类器官通常第 3–5 天开始中心变暗。
| 货号 | 名称 / CAS | 规格 | 工作浓度 | 主要作用 |
|---|---|---|---|---|
| Y43382 | Gastrin I(大鼠) CAS 81123-06-0,≥95% HPLC |
500 μg / 1 mg / 2.5 mg | 10 nM | 延长肠·肝类器官存活 |
| V33850 | N-乙酰-L-半胱氨酸 NAC CAS 616-91-1,细胞培养级 ≥99% |
25 g / 100 g / 500 g | 1 mM | 抗氧化、清除 ROS |
| V31270 | 烟酰胺 Nicotinamide CAS 98-92-0,细胞培养级 ≥99.5% |
100 g / 500 g | 10 mM | 促进成球、延长寿命 |
| S60444 | 佛司可林 Forskolin CAS 66575-29-9,≥95% HPLC |
粉末,多规格可选 | 1–10 μM | 升 cAMP,肝类器官必需 |
| S27091 | 前列腺素 E2(PGE2) CAS 363-24-6,97% |
5 mg / 10 mg / 100 mg | 1 μM | 肝·前列腺增殖支持 |
五、组织解离、传代与基础配套
原代组织解离是建系第一步,也是最容易把细胞"消化死"的一步。胶原酶按型别区分底物特异性,Ⅳ型对基底膜胶原更温和,是实体组织解离常用选择。
S10056 胶原酶Ⅳ型
BR,≥125 CDU/mg 100 mg / 500 mg / 1 g
实体组织解离、类器官传代消化
实体组织解离、类器官传代消化
S10053 / S10059 胶原酶
Ⅰ型 >125 CDU/mg(脂肪·肝·肺)/精制级 650 u/mg
100 mg ¥350 起,高活性缩短消化时间
100 mg ¥350 起,高活性缩短消化时间
V32305 胶原酶 NB 4
溶组织梭菌来源,标准级 ≥0.10 U/mg,100 mg / 500 mg
温和解离,含均衡蛋白水解副活性
温和解离,含均衡蛋白水解副活性
基础配套(同单发货):胰酶细胞消化液 0.05%(不含 EDTA,含酚红)R33089-100 mL、10×DPBS 缓冲液(不含钙镁)R32018-500 mL、青霉素-链霉素混合溶液(100× 双抗,无菌)R20016-100 mL、无血清细胞冻存液 R22368-100 mL、蛋白酶抑制剂 Cocktail S25910-1 mL。
六、常见类器官类型的抑制剂组合速查
下表为公开文献常见的小分子组合思路,用于快速确定起步方案。浓度为经验起始值,需按细胞来源、代次与基质胶批次微调。
| 类器官类型 | 核心小分子组合 | 关键添加物 |
|---|---|---|
| 小肠 / 结肠 | Y-27632 + CHIR-99021 + SB 202190 + A 83-01 | Gastrin I、NAC、烟酰胺 |
| 胃 | Y-27632 + CHIR-99021 + SB 202190 | Gastrin I、Forskolin、NAC |
| 肝脏 | Y-27632 + A 83-01 + CHIR-99021 | Forskolin、PGE2、Gastrin I、烟酰胺 |
| 胰腺 | Y-27632 + A 83-01 + CHIR-99021 | 烟酰胺、NAC |
| 乳腺 | Y-27632 + A 83-01 + SB 202190 | 烟酰胺、NAC |
| 前列腺 | Y-27632 + A 83-01 | PGE2、NAC |
| 脑 / 神经 | Y-27632 + CHIR-99021 + SB 202190 | N2 / B27 补充剂、NAC |
| 肾 / 视网膜 | CHIR-99021 + Y-27632 | N2 / B27 补充剂 |